BIS-TRIS buferi CAS 6976-37-0

Bu samarali biologik bufer bo'lib, samarali pH buferlash diapazoni 5,8-7,2 va pKa qiymati 6,5 (25 daraja). Biokimyoviy tajribalarda oqsillar va nuklein kislotalar kabi ko'plab biomolekulalar pH qiymatlariga juda sezgir va hatto pH ning kichik o'zgarishlari ularning tuzilishi va funktsiyasiga ta'sir qilishi mumkin. BIS-TRIS ushbu pH oralig'ida eritmaning pH qiymatini barqarorlashtirishi mumkin, bu esa biokimyoviy reaktsiyalar uchun barqaror muhitni ta'minlaydi.Oqsilni ajratish va tozalash jarayonida pH o'zgarishi tufayli denatürasyon yoki cho'kmaning oldini olish uchun oqsilning tabiiy konformatsiyasi saqlanib qolishi mumkin.

Masalan, ion almashinish xromatografiyasi va yaqinlik xromatografiyasi kabi oqsillarni tozalash usullaridaBIS-TRIS buferioqsillar va xromatografiya vositalari o'rtasidagi o'zaro ta'sir barqaror pH sharoitida sodir bo'lishini ta'minlashi mumkin va shu bilan tozalash samaradorligi va tozaligini oshiradi.

Ferment faolligini tahlil qilishda ferment faolligi ko'pincha ma'lum bir pH muhitiga bog'liq. Optimal pH sharoitida fermentning katalitik faolligini ta'minlash uchun reaksiya tizimining pH qiymatini aniq nazorat qilish mumkin va shu bilan ferment faolligini aniq o'lchash mumkin. Bu fermentlarning xossalarini, ta'sir qilish mexanizmlarini o'rganish va ferment preparatlarini ishlab chiqish uchun katta ahamiyatga ega.

BIS-TRIS turli metall ionlari bilan koordinatsiyalash va barqaror komplekslar hosil qilish qobiliyatiga ega, masalan, Zn ² ⁺ - BIS-TRIS, Mn ² ⁺ - BIS-TRIS va boshqalar. Bu metall ion komplekslari metallarning tuzilishi va biomoskulturasini tahlil qilishda muhim rol o'ynaydi. ionlar ko'pincha oqsillardagi faol markazlarning shakllanishida ishtirok etish uchun kofaktor sifatida ishlaydi. BIS-TRISni metall ionlari bilan muvofiqlashtirish orqali oqsil metall ionlari komplekslarining strukturasini barqarorlashtirish mumkin, bu esa strukturani tahlil qilish uchun rentgen kristallografiyasi va yadro magnit-rezonansi (YMR) kabi usullardan foydalanishni osonlashtiradi.

Masalan, rux o'z ichiga olgan ayrim fermentlarning faol markazlari o'zlarining katalitik faolligini saqlab turish uchun sink ionlarini talab qiladi va BIS{0}}TRIS Zn ² ⁺ komplekslari bu fermentlar uchun barqaror strukturaviy muhitni ta'minlaydi, bu esa ularning uch o'lchovli tuzilmalarini aniq tahlil qilishga yordam beradi.

DNK ketma-ketligi kabi nuklein kislotalarni tadqiq qilishda metall ionlari nuklein kislotalarning katlanishi va funktsional tartibga solinishida ham ishtirok etishi mumkin. BIS-TRIS va metall ionlari oʻrtasidagi muvofiqlashtirish nuklein kislotalarning mahalliy muhitini tartibga solib, nuklein kislotalar va oqsillar, kichik molekulalar va boshqalar oʻrtasidagi oʻzaro taʼsirga taʼsir qilib, nuklein kislotalarning tuzilishi va funksiyasini chuqur oʻrganish-uchun kuchli vosita boʻlishi mumkin.

BIS-TRIS oqsil elektroforezi tajribalarida muhim ilovalarga ega. SDS-PAGE (natriy dodesil sulfat poliakrilamid gel elektroforezi) va Native PAGE (denaturatsiyasiz poliakrilamid gel elektroforezi) oqsil elektroforezining keng tarqalgan usullari hisoblanadi.BIS-TRIS buferiko'pincha elektroforez paytida eritmaning pH barqarorligini ta'minlash uchun elektroforez buferini tayyorlash uchun ishlatiladi. SDS-PAGE da oqsillar SDS va merkaptoetanolni o'z ichiga olgan namuna buferida denatüratsiya qilinadi va manfiy zaryadlanadi, so'ngra poliakrilamid jelida molekulyar o'lchamiga qarab ajratiladi.

U elektroforez tamponining pH qiymatining barqarorligini ta'minlaydi, oqsillarni elektr maydonida kutilgan tarzda ko'chishiga imkon beradi, shu bilan turli molekulyar og'irlikdagi oqsillarni aniq ajratib turadi va ularning nisbiy molekulyar og'irliklarini aniqlaydi.

Native PAGE-da oqsillar elektroforetik ajratish uchun tabiiy konformatsiyasini saqlab qoladi. Undan foydalanish pH o'zgarishi tufayli oqsil denatüratsiyasini oldini oladi, oqsillarning tabiiy faolligi va konformatsion ma'lumotlarini saqlab qoladi va oqsillarning tabiiy holatini va o'zaro ta'sirini o'rganishga yordam beradi.

Western blotting - maqsadli oqsillarning ifoda darajasini aniqlash uchun ishlatiladigan muhim eksperimental usul. Bis Tris propan buferi ko'pincha immunoblotting tajribalarida oqsillarni tashish buferi sifatida ishlatiladi.

Proteinni jeldan membranaga o'tkazish jarayonida Bis Tris propan buferi barqaror pH muhitini saqlab turishi mumkin, bu esa oqsilning to'g'ri konformatsiya va zaryad holati bilan membranaga o'tkazilishini ta'minlaydi. Bu antikorlarni keyingi bog'lash va signalni aniqlash uchun juda muhimdir.

O'tkazish jarayonida oqsillar denatürasyon yoki konformatsion o'zgarishlarga duchor bo'lsa, bu antikorlarning maqsadli oqsilni aniq taniy olmasligiga olib kelishi mumkin va shu bilan eksperimental natijalarning aniqligiga ta'sir qiladi. Shuning uchun Bis Tris propan buferi immunoblotting tajribalarida hal qiluvchi rol o'ynaydi va tajribalarning sezgirligi va ishonchliligini oshirishga yordam beradi.

Hujayra madaniyati biomedikal tadqiqotlarda muhim texnologiya bo'lib, hujayra madaniyati muhitining pH qiymati hujayra o'sishi va metabolizmiga sezilarli ta'sir ko'rsatadi. BIS-TRIS propan buferi hujayra madaniyati jarayonida barqaror pH qiymatini saqlab turish uchun hujayra madaniyati muhitini tayyorlash uchun ishlatilishi mumkin.

Har xil turdagi hujayralar turli xil pH talablariga ega, lekin odatda fiziologik pH ga yaqin muhitda o'sishni talab qiladi (taxminan 7,2-7,4).

BIS-TRIS propan buferi hujayra madaniyati davomida madaniyat muhitining pH o'zgarishlarini buferlashi, metabolik mahsulot to'planishi, gaz almashinuvi va boshqa omillar tufayli yuzaga keladigan pH o'zgarishlarining oldini olish va hujayralar uchun barqaror o'sish muhitini ta'minlashi mumkin. Bu hujayralarning normal o'sishi, ko'payishi va funktsional ifodasi uchun katta ahamiyatga ega bo'lib, hujayra madaniyatining muvaffaqiyat darajasini va eksperimental natijalarning ishonchliligini oshirishga yordam beradi.

Nuklein kislota elektroforezi maqsadli nuklein kislotalarning uzunligi va kontsentratsiyasini, shu jumladan DNK va RNK elektroforezini aniqlash uchun keng qo'llaniladigan usuldir. Nuklein kislota elektroforezi tajribalari uchun javob beradi, u elektroforez tamponining pH barqarorligini saqlab turishi mumkin.

Nuklein kislota elektroforezida nuklein kislota molekulalari elektr maydoni ta'sirida o'zining kattaligi va zaryad xususiyatlariga ko'ra ko'chib o'tadi.

U elektroforez paytida eritmaning pH qiymatining barqarorligini ta'minlashi mumkin, nuklein kislota molekulalarining kutilgan tarzda ko'chishiga imkon beradi, shu bilan turli uzunlikdagi nuklein kislota qismlarini aniq ajratib turadi va ularning konsentratsiyasini aniqlaydi. Bu genlarni klonlash, gen ekspressiyasini tahlil qilish va nuklein kislotalar ketma-ketligi kabi tadqiqotlar uchun katta ahamiyatga ega.

BIS-TRIS kreatin kinazni aniqlash uchun ham ishlatilishi mumkin. Kreatin kinaz mushaklarning energiya almashinuvida hal qiluvchi rol o'ynaydigan muhim fermentdir. Uning faolligini aniqlash mushak kasalliklarini tashxislash va sport jarohatlarini baholash uchun katta ahamiyatga ega. Kreatin kinazni aniqlash tajribasida optimal pH sharoitida fermentning katalitik faolligini ta'minlash uchun reaksiya tizimining pH barqarorligi saqlanishi mumkin. PH qiymatini aniq nazorat qilish orqali kreatin kinaz faolligini o'lchashning aniqligi va ishonchliligini oshirish mumkin, bu esa klinik tashxis va tadqiqotlar uchun kuchli yordam beradi.

BIS-TRIS gemoglobinni tadqiq qilish va qo'llashda ham muhim rol o'ynaydi. Gemoglobinni ajratish jarayonida uning barqarorligi va faolligi pH o'zgarishi tufayli denatürasyon yoki agregatsiyani oldini olish uchun saqlanishi mumkin. Bu gemoglobinni tozalash va strukturaviy tadqiq qilish uchun katta ahamiyatga ega.

BIS-TRIS muzlatish{1}}quritish jarayonida gemoglobinni samarali himoya qilishi mumkin. Muzlatib quritish biologik mahsulotlarni saqlashning keng tarqalgan usuli hisoblanadi, ammo muzlatish va quritish jarayonida oqsillar shikastlanishi mumkin. U muzlatish{4}}quritish jarayonida gemoglobin uchun barqaror muhitni ta'minlashi, oqsilning denatüratsiyasi va inaktivatsiyasini kamaytirishi, muzlatilgandan keyin-gemoglobinning faolligi va barqarorligini yaxshilashi mumkin.

IEF (izoelektrik fokusli elektroforez) va 2-D gel elektroforezi murakkab oqsil aralashmalarini ajratish va tahlil qilish uchun ishlatiladigan proteomik tadqiqotlarda keng tarqalgan usullardir. BIS-TRIS IEF/2-D gel elektroforezi uchun katod elektrolit sifatida ishlatilishi mumkin.

IEF jarayonida oqsillar migratsiya qiladi va ularning izoelektrik nuqtasiga asoslangan pH gradientida fokuslanadi. BIS-TRIS katoliti elektroforez buferining pH barqarorligini saqlab turishi mumkin, bu esa izoelektrik fokuslash jarayonida oqsillarning izoelektrik nuqtasiga aniq koʻchib oʻtishini taʼminlaydi. 2-D gel elektroforezda, foydalanishBIS-TRIS buferishuningdek, oqsillarni ajratish effekti va rezolyutsiyasini yaxshilashga yordam beradi, bu esa proteomika tadqiqotlari uchun yuqori sifatli{0}}ma'lumotlarni taqdim etadi.