Thiazolyl Blue CAS 298-93-1

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. Xitoyda thiazolyl blue cas 298-93-1 ning eng tajribali ishlab chiqaruvchilari va yetkazib beruvchilaridan biri hisoblanadi. Fabrikamızdan sotiladigan ulgurji ommaviy yuqori sifatli tiazolil ko'k kas 298-93-1ga xush kelibsiz. Yaxshi xizmat va o'rtacha narx mavjud.

Tiazolil ko'kMTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid) nomi bilan mashhur bo'lgan o'ziga xos ikkilikni o'z ichiga oladi - bu hujayra biologiyasida muhim vosita va xameleon kimyoviy g'alatiligidir. Bu sariq kristall kukun tirik hujayralarda hayratlanarli metamorfozga uchraydi: mitoxondrial reduktazalar uning tetrazoliy halqasini parchalab, uni erimaydigan binafsha rangli formazan cho'kmasiga aylantiradi - bu juda hayratlanarli reaktsiya, hujayra hayotiyligini o'lchash uchun oltin standartga aylandi. Shunga qaramay, laboratoriya dastgohidan tashqari, MTT ko'proq ezoterik xatti-harakatlarni ochib beradi; uning kristall tuzilishi mikroskop ostida o'ziga xos "balyodka" naqshlarini hosil qiladi, shu bilan birga uning oksidlanish-qaytarilish xossalari ma'lum to'lqin uzunliklari yorug'lik ta'sirida ekzotik fotokimyoviy reaktsiyalarda qatnashish imkonini beradi. Qizig'i shundaki, birikma "metaxromaziya" deb nomlangan noyob hodisani namoyish etadi - konsentratsiya va molekulyar muhitga qarab turli xil ranglar paydo bo'ladi - bu xususiyat bir vaqtlar to'qimachilik kimyogarlari "aqlli" bo'yoqlarni yaratish uchun foydalangan. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar uning nafas olish zanjiri fermentlarining zaif inhibitori sifatidagi kutilmagan rolini aniqladi va bu hamma joyda mavjud bo'lgan tahlil reagenti olimlar uni o'rganish uchun foydalanadigan metabolik jarayonlarga nozik ta'sir ko'rsatishi mumkinligiga ishora qildi. Organik erituvchilarda eritilganda, MTT eritmalari fizik kimyogarlarni hayratda qoldiradigan g'ayrioddiy flüoresan o'chirish effektini ko'rsatadi, bu esa hali ham to'liq tushuntirishni kutayotgan murakkab molekulalararo o'zaro ta'sirlarni ko'rsatadi.

Tiazolil ko'k,Kimyoviy nomi 3- (4,5-dimetil-2-tiazol) -2,5-difeniltetrazolium bromid bo'lib, MTT deb qisqartiriladi, bu muhim organik birikma. Mosman birinchi marta 1983 yilda hujayra o'sishi va omon qolishini aniqlash uchun MTT bo'yashidan foydalanish haqida xabar berganligi sababli, MTT hayot fanlari, tibbiy tadqiqotlar va dori vositalarini ishlab chiqish kabi sohalarda keng qo'llanildi. Quyida uning maqsadining batafsil tavsifi keltirilgan:

Hujayra biologiyasi tadqiqotida qo'llanilishi

 

MTT hujayra proliferatsiyasini aniqlashning klassik usullaridan biridir. Hujayra madaniyati davomida tirik hujayra mitoxondriyalaridagi suksinat dehidrogenaza kabi dehidrogenazalar ekzogen MTT ni hujayrada erimaydigan ko'k binafsha rangli kristalli formazanga kamaytirishi mumkin. O'lik hujayralar bu kamaytirish qobiliyatiga ega emas va shuning uchun formazan hosil qilmaydi. Formazanni hujayralarda eritib, uning yorug'lik yutilish qiymatini ma'lum to'lqin uzunliklarida (masalan, 490nm yoki 562nm) ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) o'quvchi-yordamida o'lchash orqali tirik hujayralar sonini bilvosita aks ettirish mumkin. Hujayra raqamlarining ma'lum diapazonida hosil bo'lgan MTT kristallarining miqdori hujayralar soniga mutanosibdir, shuning uchun hujayra proliferatsiyasini o'lchangan absorbans qiymati (OD qiymati) asosida aniqlash mumkin.

Hujayra biologiyasi tadqiqotida qo'llanilishi

 

MTT in vitroda ekilgan hujayralarga dori vositalarining yoki boshqa davolash usullarining (radiatsiyaviy nurlanish kabi) toksikligini aniqlash uchun ham qoʻllanilishi mumkin. Davolash guruhi va nazorat guruhining OD qiymatlarini solishtirish orqali dorilar yoki davolash usullarining hujayra faoliyatiga ta'sirini baholash mumkin. OD qiymati qanchalik katta bo'lsa, hujayra faolligi shunchalik kuchli bo'ladi; Aksincha, bu hujayra faolligi qanchalik zaif bo'lsa yoki hujayraning toksikligi shunchalik yuqori bo'lishini ko'rsatadi. Ushbu usul dori vositalarini skrininglash, toksikologiya tadqiqotlari va boshqa sohalarda keng qo'llaniladi. MTT asosan hujayra proliferatsiyasi va sitotoksikligini o'lchash uchun ishlatilsa-da, ba'zi hollarda u hujayra apoptozini o'rganishda yordam berish uchun ham ishlatilishi mumkin. Hujayra apoptozi jarayonida hujayra ichidagi ferment faolligi o'zgaradi, bu MTT ning pasayish qobiliyatiga ta'sir qilishi mumkin. Apoptotik hujayralar va normal hujayralar o'rtasidagi OD qiymatlaridagi farqni solishtirish orqali hujayra apoptozining paydo bo'lishini oldindan aniqlash mumkin. Ammo shuni ta'kidlash kerakki, MTT hujayra apoptozini aniqlashning maxsus usuli emas va uning natijalari apoptozni aniqlashning boshqa usullari bilan birgalikda har tomonlama tahlil qilinishi kerak.

Dori vositalarini ishlab chiqishda qo'llanilishi

 

Dori vositalarini ishlab chiqish jarayonida MTT tahlili tez-tez ishlatiladigan, yuqori samarali{0}}dorilarni skrining usuli hisoblanadi. Sinov preparatini hujayralar bilan birgalikda inkubatsiya qilish va hujayra faolligidagi o'zgarishlarni o'lchash uchun MTT tahlilidan foydalanish orqali potentsial faol dori molekulalarini tezda tekshirish mumkin. Ushbu usul oson ishlash, ishonchli natijalar va yuqori o'tkazuvchanlik afzalliklariga ega va dori vositalarini ishlab chiqishning dastlabki bosqichida muhim ahamiyatga ega. MTT tahlili dori vositalarining ta'sir mexanizmini o'rganish uchun ham ishlatilishi mumkin. Dori-darmonlarni davolashning turli sharoitlarida hujayra faolligidagi o'zgarishlarni solishtirish orqali dorilarning hujayra proliferatsiyasi va apoptoz kabi jarayonlarga ta'sirini oldindan aniqlash mumkin. Western blot va oqim sitometriyasi kabi molekulyar biologiyaning boshqa usullarini birlashtirib, dorilarning maqsadlari va signalizatsiya yo'llarini yanada aniqlash mumkin. Dori xavfsizligini baholashda MTT tahlili dorilarning hujayralarga toksik ta'sirini baholash uchun ishlatilishi mumkin. Dori bilan davolashdan keyin hujayralarning OD qiymatining o'zgarishini o'lchash orqali preparatning sitotoksikligi va toksiklik kuchini aniqlash mumkin. Bu preklinik tadqiqotlar va dori-darmonlarni klinik qo'llashga rahbarlik qilish uchun katta ahamiyatga ega.

MTT ning boshqa sohalarda qo'llanilishi

 

Immunologik tadqiqotlarda MTT tahlili limfotsitlarning proliferatsiya qobiliyatini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Limfotsitlarni antijenler yoki immunostimulyatorlar bilan birgalikda inkubatsiya qilish va MTT tahlili yordamida hujayra faolligidagi o'zgarishlarni o'lchash orqali limfotsitlarning immun javob qobiliyatini baholash mumkin. Bu usul vaktsinani ishlab chiqish, immunoterapiya va boshqa sohalarda keng qo'llaniladi. Onkologiya tadqiqotlarida MTT tahlili o'simta hujayralarining proliferatsiya faolligini va dori sezgirligini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Turli dori-darmonlarni davolash sharoitlarida o'simta hujayralarining OD qiymatlari o'zgarishini solishtirish orqali o'simta hujayralariga inhibitiv ta'sir ko'rsatadigan dori molekulalarini tekshirish va ularning o'simtaga qarshi ta'sirini baholash mumkin. Bu o'smalarni klinik davolashga rahbarlik qilish uchun katta ahamiyatga ega. Atrof-muhit toksikologiyasi bo'yicha tadqiqotlarda MTT tahlili atrof-muhitni ifloslantiruvchi moddalarning hujayralarga toksik ta'sirini baholash uchun ishlatilishi mumkin. Turli xil ifloslantiruvchi moddalar konsentratsiyasiga ega hujayralarni birgalikda inkubatsiya qilish va MTT tahlilidan foydalangan holda hujayra faolligidagi o'zgarishlarni o'lchash orqali ifloslantiruvchi moddalarning toksikligi va ta'sir mexanizmini aniqlash mumkin. Bu atrof-muhitni ifloslantiruvchi moddalarning ekologik xavfini baholash va atrof-muhitni muhofaza qilish siyosatini shakllantirish uchun katta ahamiyatga ega. 

ning eksperimental bosqichlaritiazolil ko'kusul:

1: Tripsin logarifmik fazali hujayralarni hazm qiladi, sentrifugalaydi va tugatgandan so'ng hujayra suspenziyasini hosil qilish uchun ularni to'playdi va uning konsentratsiyasini hujayralar soni bo'yicha 5-10 ga sozlaydi × 104/ml. Yangi boshlanuvchilar uchun hujayralarni 5-10 × 104 / ml ga etkazish kerak, ko'pincha qaerdan boshlashni bilmaydi. Men sizga dastlab hujayralar sonini aniqlashning oddiy usulini taqdim etish uchun keldim.

Misol sifatida hujayra madaniyati uchun keng tarqalgan 25 sm2 ni oling:

1) Hujayra zichligi taxminan 80% ~ 90% (quyidagi rasmda 80% ~ 90% zichlikdagi hujayralarning taxminiy holati ko'rsatilgan). Ovqat hazm qilish va santrifüjdan so'ng, supernatantni olib tashlang va uni aralashtirish uchun 3 ml muhit qo'shing.

2) Yangi 15 ml steril santrifüj naychasini oling (96 quduqli plastinkani emlashning keyingi bosqichi uchun) va uni taxminan 9 ml muhit bilan to'ldiring.

3) Birinchi bosqichda tayyorlangan 3 ml hujayra suspenziyasidan 1 ml oling, uni yuqori trubkaga qo'shing va aralashtirgandan keyin hujayralarni hisoblang. Bu vaqtda u odatda 5-10 yoki undan kamroq × 104 / ml ni tashkil qiladi, bu hujayralarni hisoblash taxtasining 4 ta hujayrasidagi har bir hujayra uchun 5-10 hujayraga teng (quyidagi rasmga qarang); Agar konsentratsiya etarli bo'lmasa, hisoblash natijasiga ko'ra hujayra suspenziyasi qo'shiladi va har bir tomchi 50ul sifatida hisoblanadi.

4) Hujayralar soni tajribaning turli maqsadlariga qarab sozlanishi kerak. Masalan, umumiy hujayra proliferatsiyasi tajribasida har bir quduq uchun 2000 ta hujayradan (hujayra suspenziyasi zichligi 2 × 104/ml ga teng), 5000 dan 10000 gacha hujayradan (hujayra suspenziyasi zichligi 5 × 104/ml ekvivalent) foydalanish mumkin. Bundan tashqari, hujayralar soni ham o'sish tezligi kabi o'z xususiyatlariga ko'ra aniqlanishi kerak. Masalan, tezroq o'sadigan hujayralar zichligi biroz kichikroq bo'lishi mumkin.

2. Hujayra suspenziyasini tayyorlagandan so'ng, uni muloyimlik bilan aralashtiramiz va har bir teshikka 100ul qo'shing, shunda tekshiriladigan hujayralarning zichligi 5000-10000 / teshikka teng (chekka teshik steril PBS bilan to'ldiriladi).

L Eslatma: Aralashtirgandan keyin hujayralar cho'kishda davom etishi sababli, emlash jarayonida, masalan, har olti teshikda bir marta aralashtirish, emlashning hujayra zichligi teshiklar orasida aynan bir xil bo'lishini ta'minlash uchun qayta-qayta aralashtirish kerak, bu MTT natijalari uchun juda muhimdir.

3. Emlangan hujayra kulturasi plastinkasini kultivatsiya uchun inkubatorga hujayra bir qavati teshik tubi bilan qoplanmaguncha (96 teshikli tekis plastinka) qo'ying va kontsentratsiya gradienti bilan preparatni qo'shing. Printsipial jihatdan, preparat hujayra devorga biriktirilgandan keyin yoki ikki soat yoki yarim kundan keyin qo'shilishi mumkin, lekin biz ko'pincha oldingi kunning kunduzi va ertasi kuni ertalab preparatni qo'shamiz. Odatda, 5-7 gradyan, har bir teshik uchun 100ul va 3-5 ko'p teshik o'rnatiladi. 6 ni belgilash tavsiya etiladi, aks holda haqiqiy vaziyatni aks ettirish qiyin. Quyidagi rasm 96 teshikli plastinka uchun mos yozuvlar bosqichi sifatida ishlatilishi mumkin.

L Dozalash uchun ba'zi odamlar kontsentratsiya gradientini hosil qilish uchun 96-quduqli plitalarga turli hajmdagi dorilarni to'g'ridan-to'g'ri qo'shadilar. Ammo menimcha, biz EP trubkasida turli xil konsentratsiyali dorilarni aralashtirishga harakat qilishimiz kerak, so'ngra 96-quduqli plastinkadan madaniyat supernatantini olib tashlashimiz kerak (uni tushirish tabancasi bilan so'rib olish mumkin) va dori kontsentratsiyasining to'g'riligini ta'minlash mumkin bo'lgan turli konsentratsiyali dorilarni o'z ichiga olgan 100ul madaniy muhit qo'shing. Bundan tashqari, shuni ta'kidlash kerakki, agar bu usul qo'llanilsa, dori qo'shishdan oldin barcha 96 quduqli plastinka kultura eritmasini so'rib olmang. 96-quduqli plastinkaning qurishi tufayli hujayralar o'limiga yo'l qo'ymaslik uchun uning bir qismini so'rgandan so'ng darhol namunalarni qo'shishingiz kerak.

4,5% CO2 bilan 37 daraja haroratda 16-48 soat davomida inkubatsiya qiling va invert mikroskop ostida preparatning ta'sirini kuzating. Quyidagi rasmda sitotoksiklikning odatiy dori gradienti ko'rsatilgan.

4. Har bir quduqqa 10ul MTT eritmasi (5mg/ml, yaʼni . 0.5% MTT) qoʻshing va 4 soat davomida kulturani davom ettiring. Agar preparat bilan reaksiyaga kirishish mumkin bo'lsatiazolil ko'kmadaniyat eritmasi santrifüjdan keyin tashlanishi mumkin va MTT o'z ichiga olgan madaniy eritma PBS bilan 2-3 marta yuvilgandan keyin qo'shilishi mumkin.

5. Madaniyatni to'xtating va eritma va kristallanishga tayyorlang.

Tiazolil ko'k, uning xitoycha nomi Methyl Blue, tibbiyot, biologiya va kimyoda keng qo'llaniladigan muhim organik birikma. Tibbiyotda u ko'pincha nitrit zaharlanishi, siyanid bilan zaharlanish va boshqalarni davolash uchun ishlatiladi, shuningdek, ayrim kasalliklarni tashxislash va yordamchi davolashda qo'llaniladi; Biologik tadqiqotlarda u hujayralar yoki to'qimalarni markalash uchun bo'yash vositasi sifatida ishlatilishi mumkin. Biroq, ko'plab dorilar singari, metilen ko'k ham foydalanish paytida bir qator yon ta'sirga ega bo'lishi mumkin:

Ovqat hazm qilish tizimining yon ta'siri

Ko'ngil aynishi va qusish - metilen ko'kning ovqat hazm qilish tizimining keng tarqalgan yon ta'siridan biridir. Metilen ko'k tanaga kirganda, u oshqozon-ichak shilliq qavatini rag'batlantirishi mumkin, bu og'ir holatlarda ko'ngil aynishi va hatto qusishni keltirib chiqarishi mumkin. Ushbu alomat tomir ichiga yuborish tezligi juda tez yoki dozasi juda katta bo'lsa, yanada aniqroq bo'ladi. Misol uchun, ba'zi klinik holatlarda bemorlarda metilen ko'kni tomir ichiga tez yuborishdan ko'p o'tmay sezilarli ko'ngil aynish va qayt qilish mumkin, bu ularning qulayligi va davolanish tajribasiga ta'sir qiladi. Ba'zi bemorlar metilen ko'kni qo'llashdan keyin qorin og'rig'ini boshdan kechirishi mumkin va og'riq darajasi individual farqlarga qarab o'zgarishi mumkin, engil noqulaylikdan kuchliroq og'riqlargacha.

Shu bilan birga, diareya bilan birga bo'lishi mumkin, bu metilen ko'kning ichak peristaltikasi va ovqat hazm qilish funktsiyasiga aralashuvi bilan bog'liq bo'lishi mumkin, bu ichak harakatining anormalligiga va ovqat hazm qilish suyuqligi sekretsiyasining o'zgarishiga olib keladi. Qorin og'rig'i va diareya uzoq vaqt yoki tez-tez paydo bo'lishi nafaqat bemorning sog'lig'iga, balki boshqa qorin bo'shlig'iga ham ta'sir qilishi mumkin. asoratlar.

Siydik chiqarish tizimining yon ta'siri

Metilen ko'kdan foydalangandan so'ng, siydik rangi ko'k rangga aylanadi, bu esa metilen ko'k va uning metabolitlarining buyraklar orqali siydik bilan chiqarilishi natijasida yuzaga keladi. Umuman olganda, siydik rangidagi bu o'zgarish vaqtinchalik va jismoniy salomatlikka jiddiy ta'sir ko'rsatmaydi. Ammo ba'zi bir maxsus holatlarda, masalan, siydik tizimi kasalliklari bilan og'rigan bemorlar, siydik rangidagi o'zgarishlar kasallikning tashxisiga xalaqit berishi mumkin va shifokorlar boshqa tekshiruv ko'rsatkichlari asosida keng qamrovli tahlil o'tkazishlari kerak. Siydik chiqarish vaqtida ba'zi bemorlar uretraning ochilishida qichishishni his qilishlari mumkin.

 

Bu metilen ko'kning siydik yo'llarining shilliq qavatiga rag'batlantiruvchi ta'siriga bog'liq bo'lishi mumkin, ayniqsa siydik konsentratsiyasi yuqori bo'lsa yoki siydik chiqarishda siydik yo'llarining shilliq qavati ishqalanganda, qichishish hissi yanada aniqroq bo'ladi. Ushbu alomat bemorlarga ma'lum noqulaylik tug'dirishi va ularning kundalik hayotiga ta'sir qilishi mumkin.

Nevrologik nojo'ya ta'sirlar

Bosh aylanishi va bosh og'rig'i metilen ko'kning umumiy nevrologik yon ta'siridir. Metilen ko'kdan foydalangandan so'ng, bemorlarda bosh aylanishi va yo'nalishini yo'qotish yoki boshning shishishi va og'rig'i kabi noqulaylik paydo bo'lishi mumkin. Ushbu alomat bemorning diqqatini va fikrlash qobiliyatiga ta'sir qilishi, ish va hayot samaradorligini pasaytirishi mumkin. Bosh aylanishi va bosh og'rig'ining paydo bo'lishi metilen ko'kning miya qon tomirlari va nervlariga ta'siri bilan bog'liq bo'lishi mumkin va o'ziga xos mexanizm hali ham qo'shimcha tadqiqotlarga muhtoj. Kamdan kam hollarda metilen ko'k uyquchanlik, koma va boshqalar kabi ongni buzilishiga olib kelishi mumkin.

Bu, odatda, metilen ko'kning haddan tashqari ishlatilishi yoki bemorlarning preparatga haddan tashqari sezgir bo'lib, markaziy asab tizimining qattiq inhibisyoniga sabab bo'ladi. Ongning buzilishi bemorning hayotiga xavf tug'diradigan va darhol qutqaruv davolanishini talab qiladigan jiddiy yon ta'sirdir.

1.Tiazolil ko'k tetrazolium bromidi nima uchun ishlatiladi?

Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue (MTT) hujayra proliferatsiyasini o'lchashda ishlatilishi mumkin. MTT tirik hujayralarning mitoxondrial dehidrogenazalari taʼsirida toʻq koʻk rangga-erimaydigan MTT formazaniga aylanadigan sargʻish eritma hosil qiladi.

2. Thiazolyl Blue saqlash uchun xavfsizmi?

Harorat shartlari: kukunni yoping va muzlatgichda -20 darajada muzlatib saqlanishi uchun saqlang, bu saqlash muddatini samarali ravishda uzaytirishi mumkin (odatda 1-2 yil); qisqa muddatli saqlash uchun (1 oy ichida) 4 darajali sovutish sharoitida vaqtincha saqlanishi mumkin.

Yorug'likka-bardoshli va namlikka-to'liq bo'lmagan talablar: MTT kukuni yorug'likka-sezuvchan bo'lib, jigarrang reagent idishlarida yoki qalay folga bilan o'ralgan shaffof idishlarda saqlanishi kerak. Shu bilan birga, changni namlikni yutishini va pishishini oldini olish uchun quritish vositalarini (masalan, silika jeli) qo'shish kerak.

3.Tiazolil Blue rangi o'zgaradimi?

Eritma ko'k binafsha rangli cho'kmani ko'rsatsa yoki rangi qoraygan bo'lsa, u oksidlanganligini va undan foydalanishni davom ettirib bo'lmasligini ko'rsatadi.
Eritmani xona haroratida yoki yorug'lik muhitida joylashtirishdan saqlaning, chunki u tezda ishdan chiqishi mumkin.

Issiq teglar: thiazolyl blue cas 298-93-1, etkazib beruvchilar, ishlab chiqaruvchilar, zavod, ulgurji, sotib olish, narx, ommaviy, sotuv