ning asosiy komponentiIGF 1 LR3 buzadigan amallarIGF-1 LR3 (Long R3 Insulin like Growth Factor-1), genetik jihatdan ishlab chiqilgan insulinga o'xshash o'sish omili-1 (IGF-1) analogidir. U oqsil parchalanishini inhibe qilish va mushaklar sintezini rag'batlantirish orqali mushaklarning yo'qolishini qaytarishi mumkin, ammo hozirda klinikadan oldingi tadqiqotlar bilan cheklangan. Hayvonlar tajribasi shuni ko'rsatdiki, IGF-1 LR3 mushak tolasi tuzilishini yaxshilashi mumkin, ammo insoniy sinovlar hali o'tkazilmagan. IGF-1 LR3 ning neyrotrofik ta'siri aksonal regeneratsiya va neyronlarning omon qolishiga yordam berishi mumkin, ammo uning qon-miya to'sig'iga kirish qobiliyati qo'shimcha tekshirishni talab qiladi. Fibroblast proliferatsiyasini rag'batlantirish orqali jarohatni davolashni tezlashtiradi, ammo gipoglikemiya xavfidan ehtiyot bo'lish kerak.
|
|
|
IGF 1 LR3 COA
Xom ashyo va genetik muhandislik modifikatsiyasi
mahsulotning asosiy texnologiyalari
Gen manbai va xost tanlash
IGF 1 LR3 buzadigan amallargenetik rekombinatsiya texnologiyasi orqali ishlab chiqariladi va uning gen ketma-ketligi inson insuliniga o'xshash -o'sish omili-1 (IGF-1) asosida o'zgartiriladi. Ekspressiya uchun xost odatda Escherichia coli (COH shtammlari kabi) yoki sutemizuvchilar hujayralaridan (masalan, CHO hujayralari kabi) tanlanadi, ular orasida E. coli tizimi yuqori samarali va yuqori zichlikdagi fermentatsiyada arzonligi tufayli keng qo'llaniladi.
Aminokislotalar ketma-ketligini o'zgartirish
R3 mutatsiyasi: Tabiiy IGF-1 ning uchinchi aminokislotasi glutamik kislota (Glu) bo'lib, u arginin (Arg) bilan IGF-1 LR3 bilan almashtirilib, "R3" belgisini hosil qiladi. Ushbu mutatsiya uning insulinga o'xshash o'sish omilini bog'lovchi oqsillarga (IGFBP) yaqinligini sezilarli darajada kamaytiradi, uning erkin konsentratsiyasini 1000 martadan ko'proq oshiradi va biologik faolligini 2-3 marta oshiradi.
N-terminal kengaytmasi: 83 ta aminokislotadan iborat zanjir strukturasini hosil qilish uchun B zanjirining oxiriga 13 ta aminokislota qoldigʻini qoʻshing (baʼzi adabiyotlarda 93 ta aminokislota qayd etilgan, bu tozalash jarayonlari yoki aniqlash usullaridagi farqlarga bogʻliq boʻlishi mumkin), uning funksiyasini yanada optimallashtirish.
Fermentatsiya va tozalash jarayoni
fermentatsiya jarayoni
Yuqori zichlikdagi fermentatsiya: Escherichia coli ifodasi 42 daraja issiqlik zarbasi bilan qo'zg'atiladi va fermentatsiya tanki 50 litr hajmga yetishi mumkin. Maqsadli protein umumiy bakterial oqsilning 30% -40% ni tashkil qiladi.
Madaniyat muhitini optimallashtirish: Metabolik yon mahsulotlar (masalan, sirka kislotasi) to'planishini nazorat qilish va oziqlantirish partiyasini etishtirish strategiyasi orqali mahsulot tozaligini yaxshilash.
Tozalash jarayoni
Qo'pol va sof bosqich:
Ion almashinuvi xromatografiyasi: tozalikni 90% dan oshirish uchun oqsil zaryadlari farqini ajratishdan foydalanish.
Hidrofobik o'zaro ta'sir xromatografiyasi: 95% dan ortiq tozalikka erishib, aralashmalarni yanada tozalaydi.
Toza bosqich:
Molekulyar eksklyuziv xromatografiya (SEC-HPLC): Tozaligi 95% dan yuqori yoki unga teng (SDS-PAGE tomonidan aniqlangan) maqsadli oqsillarni dimerlar yoki oligomerlardan ajratib oling.
Ultrafiltratsiya kontsentratsiyasi: tamponni PBS (pH 7.4) tizimi bilan almashtirganda, tangensial oqim filtrlash texnologiyasidan foydalangan holda oqsilni konsentratsiyalang.
Terminal filtrlash: sterillikni ta'minlash uchun sterilizatsiya uchun 0,22 m m filtrli membranadan foydalaning.
sifat nazorati
Faoliyatni tekshirish: Biologik faollik MCF-7 inson ko'krak saratoni hujayralarining sarumsiz proliferatsiyasi testi bilan o'lchandi va ED50 qiymati 1,5 ng/ml dan kam yoki unga teng edi.
Soflik sinovi: SDS-PAGE va SEC-HPLC birlashgan aniqlash, tozalik 95% dan katta yoki unga teng.
Nopoklikni nazorat qilish: endotoksin miqdori 10 EU/mg dan kam yoki teng, xost oqsili qoldig'i 0,005% dan kam yoki teng, ekzogen DNK qoldig'i 10 ng/mg dan kam yoki teng.
Tayyorgarlik jarayoni va barqarorligi
Muzlatib quritishdan himoyalovchi formula
8% tregaloza yoki 5% mannitoldan 0,01% Tween 80 (erituvchi) bilan birlashganda 8% tregaloza yoki 5% mannitoldan foydalanib, 0,01% Tween 80 (erituvchi) bilan birgalikda quritish texnologiyasi-bo‘lib, namligi 3% dan kam bo‘lmagan oq kukunga aylanadi.
Barqarorlik kafolati
Uzoq muddatli saqlash
Muzlatilgan quritilgan kukun 36 oy davomida -20 darajadan -80 darajagacha saqlanishi mumkin va qayta tiklangandan keyin steril sharoitda -20 darajadan -80 darajagacha 6 oy davomida va 2 darajadan 8 darajagacha 7-10 kun davomida saqlanishi mumkin.
Tashish shartlari: Moviy muz paketlari tashish uchun muzlatgichda saqlanadi, harorat 2-8 daraja saqlanishini ta'minlaydi va qayta-qayta muzlash va erishi oldini oladi.
Ishlab chiqarish uskunalari va GMP muvofiqligi
Asosiy uskunalar
Fermentatsiya tizimi: 50L to'liq avtomatik fermentatsiya tanki (pH, erigan kislorod, haroratni onlayn kuzatish tizimi bilan jihozlangan).
Tozalash tizimi: AKTA Avant oqsil tozalagich (avtomatlashtirilgan xromatografik ajratishni qo'llab-quvvatlaydi).
Tayyorlash uskunasi: Mini purkagichli quritgich B-290 (purkagichli quritgich) yoki muzlatib quritish mashinasi (chang tayyorlash uchun).
Analitik asboblar: HPLC-MS (molekulyar og‘irlikni tasdiqlash), yorug‘likning dinamik tarqalishi analizatori (zarrachalar hajmini taqsimlashni aniqlash), ferment bilan bog‘langan immunosorbent tahlili (ELISA){1}}.
GMP muvofiqligi
Ishlab chiqarish muhiti "Dori vositalari uchun yaxshi ishlab chiqarish amaliyoti (2010 yilda qayta ko'rib chiqilgan)" ga mos keladi va bakterial endotoksinlar va xost oqsillari qoldiqlari kabi ko'rsatkichlarni qat'iy nazorat qiladi.
To'liq sifat hujjatlarini, jumladan COA (Sifat sertifikati), MSDS (Xavfsizlik ma'lumotlar varag'i) va me'yoriy qo'llab-quvvatlash hujjatlarini taqdim eting.
IGF 1 LR3 purkagichi glial hujayralarning metabolik fenotipini va funktsional differentsiatsiyasini buzadi.
IGF 1 LR3 buzadigan amallarIGF-1 LR3 komponentini o'z ichiga olgan preparat bo'lib, u sun'iy ravishda o'zgartirilgan-insulinga o'xshash-o'sish omilidir. Bu tabiiy IGF-1 ga qaraganda yuqori faollikka ega, tanadagi yarim umr ko'rish muddati va o'sishni rag'batlantiruvchi ta'sirga ega, bu ko'pchilik hujayralarning bo'linishi, ko'chishi va farqlanishiga yordam beradi. Tibbiyot sohasida IGF-1 LR3 o'zining noyob biologik xususiyatlari tufayli keng e'tiborga sazovor bo'ldi va turli kasalliklarning terapevtik imkoniyatlarini o'rganish uchun o'rganildi.
Glial hujayralar markaziy asab tizimining muhim tarkibiy qismi, jumladan mikrogliya, astrositlar va boshqalar. Ular asab tizimining normal ishlashini ta'minlashda, neyronlarning omon qolishini qo'llab-quvvatlashda va immunitet reaktsiyalarida ishtirok etishda ajralmas rol o'ynaydi. Glial hujayralarning metabolik fenotipi va funktsional holati asab tizimining sog'lig'i bilan chambarchas bog'liq bo'lib, ularning metabolizmi va faoliyatiga ta'sir qiluvchi har qanday omillar asab tizimiga sezilarli ta'sir ko'rsatishi mumkin.
Glial hujayralarning metabolik fenotipi va funktsiyasi
Glial hujayralarning turlari va tarqalishi
Markaziy nerv sistemasidagi glial hujayralarga asosan mikrogliya va astrositlar kiradi. Mikroglia markaziy asab tizimining immun hujayralari bo'lib, miya va orqa miya bo'ylab keng tarqalgan. Ular asab tizimining "qo'riqchisi" bo'lib, atrofdagi muhitdagi o'zgarishlarni doimiy ravishda kuzatib boradi va asab tizimining immun gomeostazini saqlashda hal qiluvchi rol o'ynaydi.Astrositlar markaziy asab tizimidagi glial hujayralarning eng keng tarqalgan turi bo'lib, turli shakl va funktsiyalarga ega. Astrositlar oʻz jarayonlari orqali neyronlar, qon tomirlari va boshqalar bilan yaqin aloqalar hosil qiladi, qon-miya toʻsigʻini hosil qilishda ishtirok etadi, neyronlarga ozuqaviy yordam beradi, neyrotransmitterlarning soʻrilishini va almashinuvini tartibga soladi, neyronlarning normal faoliyati va nerv signallarining uzatilishiga muhim taʼsir koʻrsatadi.
Oddiy glial hujayralarning metabolik fenotipi
Oddiy fiziologik sharoitda glial hujayralar o'ziga xos metabolik fenotiplarga ega. Mikrogliya immunitetni nazorat qilish funktsiyalarini dam olish holatida bajaradi va ularning metabolik faolligi nisbatan past bo'lib, asosan energiya olish uchun oksidlovchi fosforlanish yo'llariga tayanadi. Patogenning kirib borishi, to'qimalarning shikastlanishi va boshqalar bilan qo'zg'atilganda, mikrogliya faollashadi va ularning metabolik fenotipi sezilarli o'zgarishlarga uchraydi, glikoliz hukmron bo'lgan metabolik rejimga o'tadi, tashqi qiyinchiliklarni engish uchun energiya va bioaktiv molekulalarni tez ishlab chiqaradi.Oddiy sharoitda metabolik faollik astrotizmning metabolik ehtiyojlariga moslashadi. Ular glyukozani yutish orqali aerob oksidlanish orqali o'zlarini va neyronlarni energiya bilan ta'minlaydi. Shu bilan birga, astrositlar glutamat glutamin tsiklida ham ishtirok etadilar, neyronlar tomonidan chiqarilgan glutamatni glutaminga aylantiradilar va glutamatni qayta sintez qilish uchun uni neyronlarga qaytaradilar. Bu jarayon neyrotransmitter muvozanatini va normal neyron funktsiyasini saqlab qolish uchun juda muhimdir.
Glial hujayralarning funktsiyalari
Glial hujayralar markaziy asab tizimida bir nechta muhim funktsiyalarga ega. Immunitet hujayralari sifatida mikroglia patogenlarni, shikastlangan hujayralarni va g'ayritabiiy oqsil agregatlarini tanib, yo'q qilishi va neyroinflamatuar javoblarni tartibga solishda ishtirok etishi mumkin. Neyron rivojlanish jarayonida mikroglia ham sinaptik kesishda ishtirok etib, neyron davrlarining normal ulanishlarini shakllantirishga yordam beradi.
Astrositlarning vazifalari yanada kengroq. Ular nafaqat neyronlar uchun ozuqaviy va tizimli yordam beradi, balki neyrotransmitterlarning chiqarilishi va qabul qilinishini tartibga solishda, neyrotransmitter gomeostazini saqlashda ishtirok etadi. Bundan tashqari, astrositlar miya qon oqimini tartibga soladi va qon tomirlari bilan o'zaro ta'sir qilish orqali qon-miya to'sig'i funktsiyasini saqlab turishda ishtirok etadi, asab tizimini periferiyadagi zararli moddalardan himoya qiladi.
IGF-1 LR3 Sprayning glial hujayralarning buzilgan metabolik fenotipiga ta'siri
Metabolik jarayonlardagi o'zgarishlar
IGF-1 LR3 purkagichidagi IGF-1 LR3 glial hujayralar yuzasida IGF-1 retseptorlari bilan bog'lanish orqali quyi oqim signalizatsiya yo'llarini faollashtirishi mumkin va shu bilan glial hujayralarning metabolik yo'llariga ta'sir qiladi. Energiya almashinuvi nuqtai nazaridan, IGF-1 signalizatsiya yo'lining faollashishi glial hujayralarning oksidlovchi fosforillanishdan glikolizga o'tishiga yordam berishi mumkin. Oddiy sharoitlarda oksidlovchi fosforlanish hujayralar uchun energiya ishlab chiqarishning asosiy usuli bo'lib, yuqori samaradorlik bilan, lekin nisbatan sekin tezlikda; Glikoliz kamroq energiya ishlab chiqarsa-da, u qisqa vaqt ichida tezda energiya bilan ta'minlaydi.
IGF-1 LR3 glial hujayralarga ta'sir qilganda, u PI3K/Akt va Ras/MAPK kabi signalizatsiya yo'llarini faollashtirish orqali glikolitik fermentlarning ifodasini ko'paytirishi va glikolitik faollikni kuchaytirishi mumkin. Ushbu metabolik yo'lning o'zgarishi glial hujayralarni energiya bilan ta'minlash rejimida "buzilish" ga olib kelishi mumkin, natijada turli fiziologik yoki patologik holatlarga duch kelganda energiya almashinuvining g'ayritabiiy tartibga solinishi mumkin.
Issiq teglar: igf 1 lr3 buzadigan amallar, etkazib beruvchilar, ishlab chiqaruvchilar, zavod, ulgurji, sotib olish, narx, ommaviy, sotuv