LC553 ning aminokislotalar ketma-ketligi Ac Glu Glu Met Gln Arg Arg Ala Asp-NH2 bo'lib, uning konformatsion xususiyatlari asosan - aylanish va tasodifiy kıvrılma bilan tavsiflanadi. - burchak birinchi qoldiqning karbonil kislorodi va toʻrtinchi qoldiqning imino vodorodi oʻrtasida vodorod bogʻini hosil qiladi, bu esa peptid zanjirining 180 graduslik burmalanishiga olib keladi. Ushbu tuzilma LC553da markaziy o'rinni egallaydi. Masalan, Glu1-Asp8 ning - burchakli konformatsiyasi peptid zanjirlarining C-terminal mintaqasini barqarorlashtirishi mumkin, Met3-Arg6 ning tasodifiy jingalaklanishi esa unga konformatsion moslashuvchanlikni beradi. Ushbu "qattiq moslashuvchan" kombinatsiya LC553 ga turli mikro muhitlarning konformatsion talablariga moslashgan holda SNAP-25 bilan bog'lanish faolligini saqlab qolish imkonini beradi.

Eksperimental ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, pH 7,4 bo'lgan fosfat tampon eritmasida LC553 ning dumaloq dichroizm (CD) spektri 200 nm da salbiy cho'qqini ko'rsatadi, bu asosan tasodifiy kıvrılma bilan tavsiflanadi; 10% trifloroetanol (TFE) qo'shilgandan so'ng, 220 nm da ijobiy cho'qqi paydo bo'ldi, bu - burchak konformatsiyasining kuchayishini ko'rsatadi. Ushbu konformatsion sozlanishi uning funktsiyasi bilan chambarchas bog'liq: terining shox pardasida tasodifiy jingalak struktura peptid zanjirlari va lipid ikki qatlamlari o'rtasidagi o'zaro ta'sir energiyasini kamaytirishi mumkin, bu esa penetratsiyaga yordam beradi; Makrofaglarda beta burchak konformatsiyasi uning SNAP-25 bilan bog'lanish yaqinligini oshiradi va autofagosoma lizosoma sintezini inhibe qiladi.

LC553 ning uchinchi darajali tuzilishi hidrofobik yadro va sirt zaryadining taqsimlanishi bilan belgilanadi. Hidrofob qoldiqlar (Met3, Ala7) peptid zanjirining markazida joylashib, barqaror hidrofobik yadro hosil qiladi, zaryadlangan qoldiqlar (Glu1, Glu2, Arg5, Arg6, Asp8) esa sirtda taqsimlanadi. Ushbu "ichki hidrofobik, tashqi hidrofilik" struktura quyidagi mexanizmlar orqali maqsadli bog'lanish imkonini beradi:
Zaryadni to'ldiruvchilik: SNAP-25 ning N{0}}terminal hududi ishqoriy qoldiqlarga (Lys va Arg kabi) boy, LC553 (Glu1, Glu2, Asp8) yuzasidagi kislotali qoldiqlar esa elektrostatik o'zaro ta'sirlar orqali bog'lanishni kuchaytiradi;

Hidrofobik ankraj: Met3 va Ala7 ning hidrofobik yon zanjirlari kompleksning konformatsiyasini barqarorlashtirish uchun SNAP-25 ning hidrofobik cho'ntagiga kiritiladi;

Konformal entropiya kompensatsiyasi: Tasodifiy jingalak mintaqaning dinamik sozlanishi bog'lanish jarayonida entropiya yo'qotilishini kamaytirishi va majburiy bo'sh energiyani oshirishi mumkin.

LC553 ning konformatsion dinamikasi nafaqat SNAP-25 bilan bog'lanish qobiliyatini aniqlaydi, balki uyali signalizatsiya yo'llariga ta'sir qilish orqali funktsional kengayishiga ham erishadi. Masalan:
Ajinlarga qarshi mexanizm: teri fibroblastlarida,SNAP 8 in'ektsiyasiSNARE komplekslarining shakllanishiga to'sqinlik qiladi, atsetilxolinning chiqarilishini kamaytiradi, shu bilan mushaklarning qisqarish chastotasini pasaytiradi va ajinlar chuqurligini 63,13% ga kamaytiradi;

Immunitetni tartibga solish mexanizmi: Mycobacterium leprae bilan kasallangan makrofaglarda LC553 SNAP29 oqsilini barqarorlashtiradi, autofagosoma lizosoma sintezini tiklaydi va bakterial yukni 70% ga kamaytiradi;

Yallig'lanishga qarshi mexanizm: LC553 raqobatbardosh ravishda nAChR ning 7-kichik birligi bilan bog'lanishi, TNF - - induktsiyalangan NF - KB yadro translokatsiyasini inhibe qilishi va IL-6 va IL-8 sekretsiyasini kamaytirishi mumkin.

Ushbu o'zaro faoliyat shkala effekti peptid zanjiri konformatsiyasini dinamik sozlashdan kelib chiqadi: ajinlarga qarshi terapiyada LC553 asosan tasodifiy jingalakni namoyon qiladi, bu esa mushak hujayralari bilan o'ziga xos bo'lmagan -bog'lanishni kamaytiradi; Immunitetni tartibga solishda - burchak konformatsiyasining kuchayishi uning maqsadli oqsillar bilan o'ziga xos tanib olish qobiliyatini yaxshilaydi.

LC553 ning asosiy etkazib berish maqsadi sifatida terining to'siq funktsiyasi shox parda (SC) tomonidan ustunlik qiladi. SC keratinotsitlar (g'ishtlar) va hujayralararo lipidlar (ohak) dan iborat bo'lib, zich "g'isht devori tuzilishi" ni tashkil qiladi. Ularning orasida lipid matritsasi asosan keramidlar, xolesterin va erkin yog 'kislotalaridan iborat bo'lib, ularning joylashishi peptid zanjirlarining penetratsion samaradorligini belgilaydi.

Tajribalar shuni ko'rsatdiki, LC553 ning molekulyar og'irligi (1075,16 Da) va gidrofilligi (logP=-2.1) SC ga bevosita kirib borishni qiyinlashtiradi. Biroq, uning konformatsion dinamikasi to'siqlarni engib o'tish imkoniyatini beradi:

Tasodifiy jingalak penetratsion energiya to'sig'ini kamaytiradi: SC ning lipid ikki qatlamida LC553 ning tasodifiy kıvrılma tuzilishi lipid molekulalari bilan o'zaro ta'sir qilish energiyasini kamaytirishi mumkin, an'anaviy peptidning 15 kkal / mol dan penetratsion energiya to'sig'ini 8 kkal / molgacha kamaytiradi;

- burchak oʻzaro hujayra tashishni taʼminlaydi: keratinotsitlarda LC553 ning - burchak konformatsiyasi hujayra membranasidagi transport oqsillari tomonidan tan olinishi va endositoz orqali sitoplazmaga kirishi mumkin.

LC553 ni nafas olish va oshqozon-ichak trakti kabi shilliq qavatlarga etkazib berish shilliq qavatidan qiyinchiliklarga duch keladi. Mukus musin, lipidlar va immunoglobulinlardan iborat bo'lib, g'ovak o'lchamlari 10-1000 nm diapazoniga ega bo'lgan dinamik "filtr" strukturasini hosil qiladi, bu nanozarrachalar va peptid preparatlarining 90% dan ko'prog'ini tuta oladi.
Mukusdan olingan protein koronasining shakllanishi etkazib berish jarayonini yanada murakkablashtiradi.

LC553 nanozarralari shilimshiq, musin, immunoglobulin A (IgA) bilan aloqa qilganda va komplement oqsillari zarrachalar yuzasiga tezda adsorbsiyalanib, "qattiq toj" va "yumshoq toj" hosil qiladi. Ularning orasida qattiq toj yuqori afinitetli va tez hosil bo'lgan oqsillardan iborat; Yumshoq toj ajralishi oson bo'lgan past afinitetli oqsillardan iborat. Protein tojining tarkibi va qalinligi nanozarrachalarning shilliq qavatining kirib borish qobiliyatiga bevosita ta'sir qiladi.

Qattiq tojning himoya ta'siri: Qattiq tojdagi musin vodorod bog'lanishi va hidrofobik o'zaro ta'sirlar orqali LC553 bilan bog'lanishi mumkin, bu uning maqsadli hujayralar bilan o'zaro ta'sirini oldini oladigan barqaror kompleks hosil qiladi;
Yumshoq tojning dinamik regulyatsiyasi: yumshoq tojdagi IgA va komplement oqsillari LC553 ni fermentativ gidroliz yoki konformatsion o'zgarishlar orqali chiqarib, uning faoliyatini tiklaydi.

Tajribalar shuni ko'rsatdiki, shilimshiqdagi o'zgartirilmagan LC553 nanopartikullarining diffuziya koeffitsienti atigi 0,1 × 10 ⁻⁷ sm²/s ni tashkil qiladi, musin bilan oldindan qoplangan nanozarrachalarning diffuziya koeffitsienti esa 1,2 × 10 ⁻⁻⁷ s ga ko'tarilishi mumkin, bu proteinning dinamik koeffitsientini ko'rsatadi. shilimshiq to'siqni yorib o'tishning kaliti.

LC553 teri yoki shilliq qavat to'sig'iga muvaffaqiyatli kirib borsa ham, u hali ham hujayra ichidagi etkazib berish to'siqlarini engib o'tishi kerak. Endositik lizosoma yo'li hujayralar ekzogen moddalarni qabul qilishning asosiy usuli hisoblanadi, ammo kislotali muhit (pH 4,5-5,0) va bu yo'lning fermentativ gidrolizi LC553 ni sezilarli darajada buzishi mumkin. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, endosomalarda LC553 ning yarimparchalanish davri atigi 15 minutni tashkil qiladi, lizosomalarda esa u 5 minutgacha qisqaradi. Etkazib berish samaradorligini oshirish uchun quyidagi strategiyalar orqali endotsitik qochishga erishish kerak:

PH sezgir tashuvchi: Polietilen glikol polilaktik kislota gidroksikatik kislota sopolimeri (PEG-PLGA) yordamida tayyorlangan nanozarrachalar endosomalarning kislotali muhitida dissotsiatsiyalanib, ajralishi mumkin.SNAP 8 in'ektsiyasi;
Membran termoyadroviy peptid modifikatsiyasi: HA2 peptidini (gripp virusidan olingan) LC553 bilan kovalent bog'lash nanozarrachalarning endositik membranalar bilan birlashishiga yordam beradi, tarkibning chiqarilishiga erishadi; Hujayraga penetratsion peptidlar (CPPs) Yordam beradi: TAT peptidlarini HLC5 bilan birlashtirish (HLC5) transmembran tashish qobiliyati, hujayralarni qabul qilish tezligini uch barobar oshiradi.

SNAP 8 in'ektsiyasi(Acetyl Octapeptide-3 Injection) yangi polipeptidli qarishga qarshi mahsulot va klassik qarishga qarshi-Argireline (Asetilgeksapeptid-8) ning yangilangan versiyasidir. Uning peptidlar ketma-ketligiga ikkita aminokislota qo'shilsa, uning qarishga qarshi faolligi sezilarli darajada yaxshilanadi. U keng qo'llaniladi va yuzning qarishiga qarshi{11}}va teri tuzilishini yaxshilashda ajoyib samara beradi. Yumshoq ta'sir, yuqori xavfsizlik va aniq tiklanish davriga ega bo'lmagan holda, u mashhur minimal invaziv qarishga qarshi terapiyaga aylandi. Uning asosiy mexanizmi SNAP-25 oqsilining N-terminal fragmentini taqlid qilish, SNARE kompleksining shakllanishini raqobatbardosh tarzda inhibe qilish va neyrotransmitter atsetilxolinning tarqalishini kamaytirishdir.

Bu-qisqarilgan yuz mushaklarini bo'shashtiradi, dinamik ajinlarni tubdan yaxshilaydi va bir vaqtning o'zida teri tuzilishini tartibga soladi,-qarilikka qarshi va terini yoshartirishning ikki tomonlama ta'siriga erishadi.

Yuzning qarishiga- qarshi mahsulot asosan tez-tez yuz ifodalash natijasida paydo bo'ladigan dinamik ajinlar, jumladan peshona chiziqlari, glabellar, qarg'a oyoqlari va burun-lab burmalariga mo'ljallangan. Klinik tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, tabiiy va an'anaviy bo'lmagan -qattiq ifoda oqibati, tez-tez sezilmaslik va nojo'ya oqibatlar tufayli ajinlar chuqurligini 63% gacha kamaytirishi mumkin. toksin in'ektsiyasi.

U in'ektsiyadan keyin taranglashgan yuz mushaklarini tezda engillashtiradi va dinamik ajinlar paydo bo'lishini kamaytiradi. Shu bilan birga, u dermal qatlamda kollagen sintezini rag'batlantiradi, terining elastikligini oshiradi va shakllangan statik ajinlarni asta-sekin yo'q qiladi. Muntazam uzoq{2}} muddatli in'ektsiya ajinlar chuqurlashishini kechiktirishi va yuzning yosh holatini saqlab turishi mumkin. Teri tuzilishini yaxshilash uchun mahsulot teri metabolizmini tartibga soladi, dag'allik, xiralik va kengaygan teshiklarni yo'qotadi, teri yog'i-suv muvozanatini saqlaydi va terini{5}}nozik va porloq qilish uchun suv muvozanatini mustahkamlaydi. Uning yumshoq tarkibi nozik teriga mos keladi, in'ektsiyadan keyin aniq tirnash xususiyati yo'q.

Shuningdek, u teri to'sig'ini tiklaydi va terining tashqi muhitga etkazilgan zararini kamaytiradi, ayniqsa kech uyqudan va ultrabinafsha nurlanishidan kelib chiqqan teri holati yomon bo'lgan odamlar uchun mos keladi. Bundan tashqari, u mezoterapiya, radiochastota va boshqa estetik loyihalar bilan birlashtirilishi mumkin,{1}}qarishga qarshi samaradorlikni yanada optimallashtirish hamda ajinlar yo‘qolishi va terini yoshartirish kabi ikki tomonlama maqsadlarga erishish mumkin. Inyeksiyadan keyin uzoq tiklanish davri talab etilmaydi, kundalik hayot va ish faoliyatiga ta'sir qilmaydi, zamonaviy odamlarning qarishga qarshi{3}}talablariga javob beradi. An'anaviy in'ektsiya dozasi har bir joyga 0,33-1 mg ni tashkil qiladi, yuzning ajinlari holatiga qarab sozlanadi. Davolash kursi 12 hafta davomida haftasiga 1–2 marta inyeksiyadan iborat boʻlib, barqaror qarishga qarshi{11}}va terini tozalash effektlarini beradi.

Preparatning farmakokinetikasi to'rtta asosiy jarayonni o'z ichiga oladi: so'rilish, tarqatish, metabolizm va chiqarilish. Katta molekulyar og'irligi (~ 1075,16 Da) va kuchli hidrofillik xususiyatiga ega bo'lgan oktapeptid birikmasi sifatida u polipeptidli dorilarning tipik in vivo xususiyatlarini taqdim etadi. Garchi joriy tadqiqotlar asosan o'xshash polipeptidlar asosida klinik qo'llanilishi ma'lumotlari bilan birlashtirilgan bo'lsa-da, uning asosiy farmakokinetik xususiyatlari aniqlangan va bu ratsional klinik qo'llash uchun asos bo'lib xizmat qiladi.

Absorbtsiya: Mahsulot teri ostiga mikroin'ektsiya yo'li bilan maqsadli yuz mushaklari atrofidagi yuzaki teri osti to'qimalariga kiritiladi. Mahalliy to'qimalar tomonidan tez so'rilishi mumkin, mahalliy formulalarga qaraganda yuqori bioavailability.

Samarali mahalliy to'qimalar kontsentratsiyasiga in'ektsiyadan keyin 1-2 soat ichida erishiladi va maksimal plazma kontsentratsiyasi 4-6 soatdan keyin paydo bo'ladi. So'rilish darajasi in'ektsiya dozasi bilan ijobiy bog'liqdir: past doza (50 ug / sayt) yumshoq so'rilishni ko'rsatadi, yuqori dozada (100 ug / sayt) esa plazma kontsentratsiyasining keskin o'sishisiz, yuqori xavfsizlikni ta'minlaydigan bir oz tezroq so'rilish tezligiga ega. Katta molekulyar og'irligi tufayli u buzilmagan shox pardaga osonlikcha kira olmaydi, bu teri osti mikroin'ektsiyasini topikal qo'llashning etarli darajada so'rilmasligini oldini olish uchun asosiy samarali yuborish usuliga aylantiradi.

Tarqatish: In'ektsiyadan so'ng, LC553 asosan in'ektsiya joyi atrofidagi teri to'qimalari va mushaklarida cheklangan tizimli tarqalishi va kichik tarqalish hajmi bilan taqsimlanadi. U qon-miya to'sig'i va platsenta to'sig'ini deyarli kesib o'tmasdan, aniq tizimli to'planishsiz.

Metabolizm: U asosan tez almashinuv jarayonida mahalliy to'qimalarda peptidazalar va proteazlar tomonidan parchalanadi. Asosiy metabolitlar aminokislotalar bo'laklari bo'lib, ular keyinchalik zaharli metabolitlar ishlab chiqarmasdan organizm tomonidan so'rilishi va ishlatilishi mumkin.

Uning N-terminal atsetilatsiya modifikatsiyasi aminopeptidaza ta'sirida degradatsiyaga ma'lum darajada qarshilik ko'rsatishga va mahalliy ta'sir vaqtini uzaytirishga imkon beradi. Uning umumiy yarim umri-bir necha daqiqadan bir necha soatgacha davom etadi, bu shunga o'xshash polipeptid preparatlariga mos keladi va samaradorlikni saqlab qolish uchun muntazam ravishda takroriy in'ektsiya qilish kerak.

Chiqarish: Metabolizm natijasida hosil bo'lgan aminokislota bo'laklari asosan buyraklar orqali siydik bilan chiqariladi, oz miqdori safro orqali ichak traktiga chiqariladi. Aniq ekskretsiya buzilishlari kuzatilmaydi. Buyrak funktsiyasi normal bo'lgan odamlar uchun dozani sozlash kerak emas va in vivo to'planishi haqida hech qanday dalil yo'q. Uzoq{3}}muntazam in'ektsiya chiqarish yukini oshirmaydi.